為進(jìn)一步規(guī)范和指導(dǎo)**臨床試驗(yàn)抗體分析的研究，我中心組織起草了《**臨床試驗(yàn)抗體分析方法研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）》，現(xiàn)在中心網(wǎng)站予以公示，以廣泛聽取各界意見和建議，歡迎各界提出寶貴意見和建議，并請(qǐng)及時(shí)反饋給我們，以便后續(xù)完善。

       征求意見時(shí)限為自發(fā)布之日起1個(gè)月。

       請(qǐng)將您的反饋意見發(fā)到以下聯(lián)系人的郵箱：

       聯(lián)系人：王遠(yuǎn)征，李英麗

       聯(lián)系方式：wangyuanzheng@cde.org.cn,liyl@cde.org.cn

       感謝您的參與和大力支持。

       國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心

       2020年11月24日

       《**臨床試驗(yàn)抗體分析方法研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（征求意見稿）起草說明

       **免疫原性評(píng)價(jià)是**臨床評(píng)價(jià)體系中的重要內(nèi)容之一，而**抗體又是**免疫原性評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。為引導(dǎo)企業(yè)在**研發(fā)中規(guī)范開展**抗體分析方法的研究，并提供可參考的技術(shù)規(guī)范，藥品審評(píng)中心組織起草了《**臨床試驗(yàn)抗體分析方法研究指導(dǎo)原則》，經(jīng)中心內(nèi)部討論以及專家會(huì)討論，形成征求意見稿。現(xiàn)將有關(guān)情況說明如下：

       一、起草背景和目的

       創(chuàng)新型**研發(fā)時(shí)，現(xiàn)有的抗體分析方法可能無法適用，需要結(jié)合**的特點(diǎn)重新建立新的抗體分析方法。為了指導(dǎo)和規(guī)范創(chuàng)新型**的抗體分析方法研究，特制定本指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則中有關(guān)方法學(xué)驗(yàn)證部分的相關(guān)內(nèi)容同樣適用于目前已有的抗體分析方法。本指導(dǎo)原則僅針對(duì)**臨床試驗(yàn)中抗體分析方法的建立和驗(yàn)證提出一般要求，細(xì)胞免疫分析方法不在討論范圍內(nèi)。

       二、起草過程

       本指導(dǎo)原則由生物制品臨床部部牽頭，自2019年3月啟動(dòng)，核心工作組經(jīng)調(diào)研起草后，于2020年10月形成初稿，小范圍征求部分專家意見后，經(jīng)藥審中心內(nèi)部討論，技術(shù)委員會(huì)審核，召開了專家研討會(huì)，綜合專家意見形成征求意見稿。

       三、主要內(nèi)容與說明

       本指導(dǎo)原則旨在為創(chuàng)新型**的新建抗體分析方法研究提供指導(dǎo)和建議。僅針對(duì)**臨床試驗(yàn)中抗體分析方法的建立和驗(yàn)證提出一般要求。研發(fā)單位可參照本原則的**和一般要求，采取具體問題具體分析的方法，確定適宜的研究方案。本指導(dǎo)原則正文主要內(nèi)容包括：前言、一般原則、分析方法建立、分析方法的驗(yàn)證、制定方法的SOP以及方法的實(shí)施等。

       本指導(dǎo)原則僅代表當(dāng)前的觀點(diǎn)和認(rèn)識(shí)，僅為業(yè)界提供參考，不具有強(qiáng)制性的法律約束力。隨著行業(yè)的發(fā)展和監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)的積累，相關(guān)要求將不斷修訂和完善。

       **臨床試驗(yàn)抗體分析方法研究技術(shù)指導(dǎo)原則

       一、前言

       **研發(fā)是一個(gè)復(fù)雜而漫長的過程。免疫原性是**研發(fā)各個(gè)階段（從臨床前**候選物的免疫原性評(píng)價(jià)到臨床研究及上市后研究）及**有效性評(píng)價(jià)時(shí)需要關(guān)注的重要指標(biāo)之一。**大多是通過刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體而發(fā)揮其預(yù)防作用。因此，抗體分析方法的研究亦是**研發(fā)的重要內(nèi)容之一。在**研發(fā)早期就應(yīng)同步考慮開展抗體分析方法研究，建立能夠有效評(píng)價(jià)免疫原性的分析方法，并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。研發(fā)單位可自行建立和驗(yàn)證抗體分析方法，也可委托具有相關(guān)資質(zhì)或質(zhì)量保證體系的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

       創(chuàng)新型**研發(fā)時(shí)，現(xiàn)有的抗體分析方法可能無法適用，需要結(jié)合**的特點(diǎn)重新建立新的抗體分析方法。為了指導(dǎo)和規(guī)范創(chuàng)新型**的抗體分析方法研究，特制定本指導(dǎo)原則，希望能為建立新的抗體分析方法提供建議。該指導(dǎo)原則中有關(guān)方法學(xué)驗(yàn)證部分的相關(guān)內(nèi)容同樣適用于目前已有的抗體分析方法。

       本指導(dǎo)原則僅針對(duì)**臨床試驗(yàn)中抗體分析方法的建立和驗(yàn)證提出一般要求，細(xì)胞免疫分析方法不在討論范圍內(nèi)。由于**類藥品具有復(fù)雜性和多樣性的特點(diǎn)，其免疫學(xué)分析方法也多種多樣，研發(fā)單位可參照本原則的**和一般要求，采取具體問題具體分析的方法，確定適宜的研究方案。

       本指導(dǎo)原則僅代表當(dāng)前的觀點(diǎn)和認(rèn)識(shí)，僅為業(yè)界提供參考，不具有強(qiáng)制性的法律約束力。隨著行業(yè)的發(fā)展和監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)的積累，相關(guān)要求將不斷修訂和完善，鼓勵(lì)各方與藥監(jiān)機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通。

       二、一般原則

       方法研究應(yīng)遵循“以終為始”的理念，基于方法的預(yù)期目標(biāo)設(shè)計(jì)研究方案?？贵w分析方法研究是確定該方法的設(shè)計(jì)與操作適用于**特異性抗體檢測(cè)的過程，且是不斷發(fā)展完善的。

       方法驗(yàn)證是對(duì)該分析方法的評(píng)價(jià)，是通過一系列實(shí)驗(yàn)室研究來證明所使用的分析方法的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用要求的過程。**抗體分析方法的驗(yàn)證具體是指證明該方法能在復(fù)雜的生物基質(zhì)（血清或血漿）中穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確地檢測(cè)出**特異性抗體的過程。

       驗(yàn)證的程度取決于**開發(fā)的階段和分析方法的重要性。對(duì)于臨床開發(fā)的早期階段，可選擇部分驗(yàn)證指標(biāo)。對(duì)于應(yīng)用于關(guān)鍵研究和上市后研究的分析方法則要經(jīng)過全面驗(yàn)證。

       三、分析方法的建立

       （一）方法選擇的一般考慮

       **臨床試驗(yàn)中常用的抗體分析方法一般包括：標(biāo)記免疫試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)以及補(bǔ)體參與的試驗(yàn)等。免疫原性分析方法的選擇應(yīng)基于所檢測(cè)抗體的類型及特點(diǎn)（結(jié)合抗體、中和抗體及抗體水平、親和力等）、對(duì)應(yīng)抗原物質(zhì)的特點(diǎn)（顆粒性抗原、可溶性抗原等）和檢測(cè)的目的（定性、半定量、定量）等確定。必要時(shí)，還需考慮自然感染和**免疫抗體的差異。

       對(duì)于創(chuàng)新型**，保護(hù)效力與免疫原性的相關(guān)性尚未確定，在早期研究中應(yīng)選擇多個(gè)免疫原性指標(biāo)進(jìn)行探索。在進(jìn)入臨床研究時(shí)應(yīng)至少已建立一種可用于抗體水平初步評(píng)估的分析方法，以利于早期臨床試驗(yàn)中**劑量的選擇。在注冊(cè)臨床試驗(yàn)之前還應(yīng)建立一種用于檢測(cè)功能性抗體的方法，并經(jīng)過驗(yàn)證。

       （二）方法建立時(shí)關(guān)鍵要素的考慮

       分析方法的建立應(yīng)具有充分的理論基礎(chǔ)，并闡釋清楚，包括但不限于檢測(cè)抗體針對(duì)的免疫原或者表位信息、檢測(cè)方法的原理、檢測(cè)關(guān)鍵原料和過程等內(nèi)容。若新建方法與同類**公認(rèn)評(píng)價(jià)方法不同，還應(yīng)考慮方法間的相關(guān)性。

       分析方法的主要原材料、試劑及其使用條件和劑量應(yīng)經(jīng)過選擇并最終確認(rèn)。原材料及試劑應(yīng)來源清晰、質(zhì)量可控。在分析方法建立的過程中，應(yīng)描述和記錄關(guān)鍵材料和試劑，如果某些試劑為自行制備或?qū)Σ少彽脑噭┻M(jìn)行了加工處理，則應(yīng)詳細(xì)記錄制備或處理過程；此外，建議詳細(xì)記錄檢測(cè)條件和關(guān)鍵參數(shù)的變更，以及出現(xiàn)的問題及其解決方案，以便為方法建立和使用過程中的任何變更提供依據(jù)。本指導(dǎo)原則結(jié)合**臨床血清抗體檢測(cè)方法的特點(diǎn)重點(diǎn)闡述以下幾個(gè)方面內(nèi)容，為方法建立時(shí)提供參考。

       1標(biāo)準(zhǔn)品

       國家生物標(biāo)準(zhǔn)品及生物參考品，系指用于含量或生物制品效價(jià)等測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的來源應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定。企業(yè)工作標(biāo)準(zhǔn)品或參考品必須經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品標(biāo)化后方能使用。對(duì)于尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的情況，在方法研究的早期，可用陽性血清或抗體先自行制備陽性對(duì)照品并進(jìn)行初步標(biāo)定，應(yīng)詳細(xì)記錄其制備、標(biāo)定過程。該對(duì)照品應(yīng)能確保在**研發(fā)及上市階段的延續(xù)性及可追溯性。

       2質(zhì)控品

       質(zhì)控品即質(zhì)量控制物質(zhì)，是一種穩(wěn)定的物質(zhì)，一般用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制，以保證分析方法的性能可靠。包括陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。應(yīng)明確質(zhì)控品的來源、制備過程及調(diào)整過程。

       陽性質(zhì)控品可分為定值和非定值兩種情況。定值質(zhì)控品有分析方法或過程分析的參考值，并指定參考范圍；非定值質(zhì)控品可以在標(biāo)貼上標(biāo)示目標(biāo)濃度（如：低、高、中），但是沒有指定的參考范圍?？筛鶕?jù)方法研究的不同階段，或?qū)Ψ椒ň芏群蜏?zhǔn)確性要求的不同，選擇不同的陽性質(zhì)控品。在**研發(fā)的早期，可能無法獲得來自人體的陽性質(zhì)控，也可以通過免疫動(dòng)物獲得，但前提是所建立的分析方法對(duì)樣品的要求不受動(dòng)物種屬的限制。此外，單個(gè)或混合的單克隆抗體也可作為陽性質(zhì)控抗體使用。陽性質(zhì)控品參考值的確定可參考標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的相關(guān)規(guī)定。

       一般情況下，陰性質(zhì)控品應(yīng)來自受試人群免前血清或其他健康人群血清樣品，但要注意因?yàn)椴煌巳貉鍢悠繁镜椎牟煌瑢?duì)檢測(cè)可能帶來的影響。

       3方法非特異性的控制

       方法的建立過程應(yīng)在保證合適的靈敏度的同時(shí)，盡可能地減少非特異性干擾。從實(shí)驗(yàn)器材到原料試劑都可能影響方法的靈敏度和抗原抗體的特異性結(jié)合。因此，需選擇合適的緩沖液或阻斷劑來防止非特異性結(jié)合，對(duì)于標(biāo)記免疫試驗(yàn)，還應(yīng)考慮合理的洗滌步驟和時(shí)間，以及洗滌液的成分，以減少背景信號(hào)，同時(shí)保持靈敏度。當(dāng)更換實(shí)驗(yàn)器材或原料試劑時(shí)，需要對(duì)方法學(xué)變更前后進(jìn)行比對(duì)，必要時(shí)可能需要重新優(yōu)化反應(yīng)條件或程序。

       血清樣品中成分復(fù)雜，基質(zhì)成分也會(huì)產(chǎn)生非特異性干擾（如游離血紅蛋白、脂質(zhì)、膽紅素以及非特異性抗體的存在，甚至樣品的制備處理過程中引入的外來物質(zhì)），可能增強(qiáng)或抑制特異性信號(hào)的產(chǎn)生，造成假陽性或假陰性結(jié)果。因此，需采用科學(xué)的方法，探索確定最佳的最小稀釋度，有效地將基質(zhì)的干擾控制在可接受的范圍內(nèi)，在滿足靈敏度要求基礎(chǔ)上，并保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

       4cut-off值的確定

       cut-off值是決定結(jié)果陰陽性的依據(jù)。確定合適的cut-off值對(duì)于準(zhǔn)確判定結(jié)果有重要意義。cut-off值確定的原則是要使其得到的檢測(cè)結(jié)果假陰性和假陽性的發(fā)生率最低。根據(jù)方法檢測(cè)目的和對(duì)方法性能指標(biāo)的要求的不同，可將cut-off值和檢出限統(tǒng)籌考慮。

       用于**臨床血清抗體檢測(cè)的方法，除檢測(cè)免后血清抗體水平外，還需檢測(cè)免前血清抗體情況，以分析人群中抗體基線情況，并確定合理的免后陽轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)。因此cut-off值是**臨床血清抗體檢測(cè)的方法研究中關(guān)注一個(gè)重要指標(biāo)。一般需要以一定數(shù)量的臨床試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)人群陰性血清來確定cut-off值。當(dāng)待測(cè)血清的目標(biāo)人群發(fā)生變化時(shí)可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行重新確定或調(diào)整cut-off值?？紤]到對(duì)某些傳染性疾病，人群中可能存在較多的隱性感染，導(dǎo)致免前人群已存在一定水平的抗體。為準(zhǔn)確反映人群中抗體本底情況，必要時(shí)也可以考慮使用其它陰性人群的血清來確定cut-off值。但需充分評(píng)估界值的調(diào)整對(duì)免疫原性（如陽轉(zhuǎn)率）評(píng)價(jià)可能帶來的影響。確定cut-off值時(shí)，應(yīng)選擇一定數(shù)量具有代表性的血清，一般不少于100份，至少進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)。

       當(dāng)cut-off值及最低檢測(cè)限（見下文）確定后，可能會(huì)存在灰區(qū)范圍，即無法準(zhǔn)確判定陽性或陰性的范圍?？筛鶕?jù)對(duì)檢測(cè)方法性能（如，靈敏度或特異性）要求程度的不同，適當(dāng)調(diào)整灰區(qū)范圍。

       5待測(cè)樣品

       **免疫原性分析的待測(cè)樣品以血清為主。血清樣品可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，如方法驗(yàn)證過程中未對(duì)溶血樣品進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)特別標(biāo)注溶血樣品處理措施。一般在短期內(nèi)測(cè)定的樣品可放置于2-8℃，超過一定時(shí)間測(cè)定則需低溫凍存；應(yīng)避免反復(fù)凍融，如需多次檢測(cè)，建議少量分裝凍存。建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。待測(cè)樣品采集、保存條件等應(yīng)符合下述方法耐用性驗(yàn)證要求。

       6關(guān)鍵性能指標(biāo)的評(píng)估

       在分析方法的開發(fā)階段就應(yīng)關(guān)注關(guān)鍵性能指標(biāo)的評(píng)估。根據(jù)檢測(cè)目的和方法特點(diǎn)的不同，抗體分析方法開發(fā)過程中需要評(píng)估的性能指標(biāo)有所不同。一般來說，定性方法可能需要關(guān)注專屬性、檢測(cè)限，定量和半定量方法可能需要關(guān)注專屬性、檢測(cè)限、線性、線性范圍、準(zhǔn)確度和精密度。

       四、抗體分析方法的驗(yàn)證

       （一）驗(yàn)證的一般考慮

       任何分析檢測(cè)的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。方法驗(yàn)證是指監(jiān)控整個(gè)方法使用過程的性能特征，以確保方法的有效性和數(shù)據(jù)的可靠性。方法驗(yàn)證的結(jié)果可以用于判斷分析結(jié)果的質(zhì)量、可靠性和一致性，這是所有質(zhì)量管理體系不可分割的一部分。

       在開始驗(yàn)證前，應(yīng)根據(jù)方法的特點(diǎn)及檢測(cè)目的的需要，合理選擇的驗(yàn)證指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)，制定詳細(xì)的驗(yàn)證方案。方法驗(yàn)證需根據(jù)驗(yàn)證方案來完成。驗(yàn)證方案應(yīng)包括驗(yàn)證設(shè)計(jì)、驗(yàn)證指標(biāo)、合理的可接受標(biāo)準(zhǔn)以及不符合可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)可采取的措施等。新建方法時(shí)，應(yīng)分析對(duì)方法影響最大的因素并進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證。

       根據(jù)情形不同，分析方法的驗(yàn)證包括完整驗(yàn)證、部分驗(yàn)證和交叉驗(yàn)證。驗(yàn)證的程度和指標(biāo)參數(shù)的考慮應(yīng)該基于研究的目的。驗(yàn)證后應(yīng)能表明優(yōu)化后的方法適用于樣品的檢測(cè)和分析。方法驗(yàn)證的原始數(shù)據(jù)應(yīng)妥善保存以供檢查。

       1.完整驗(yàn)證

       對(duì)于創(chuàng)新型**，往往缺少可參考的方法，通常需要建立一種新的分析方法，對(duì)于這類方法建議針對(duì)所有相關(guān)指標(biāo)均開展全面而嚴(yán)格的驗(yàn)證。

       定性抗體分析方法完整驗(yàn)證的性能指標(biāo)一般應(yīng)包括專屬性、檢測(cè)限（靈敏度）、重復(fù)性和穩(wěn)定性；定量或半定量抗體分析方法完整驗(yàn)證的性能指標(biāo)一般應(yīng)包括特異性、檢測(cè)限（靈敏度）、線性、線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度和耐用性。

       2.部分驗(yàn)證和重新驗(yàn)證

       對(duì)現(xiàn)有已驗(yàn)證方法的任何改變，可根據(jù)改變的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，先評(píng)估需要再次驗(yàn)證的相關(guān)指標(biāo)參數(shù)，再進(jìn)行部分驗(yàn)證或重新驗(yàn)證。方法的改變一般包括：方法在實(shí)驗(yàn)室之間的轉(zhuǎn)移；方法本身的變化（例如，部分關(guān)鍵試劑的變化）；樣品處理程序的變化；儀器和/或軟件平臺(tái)的變化；基質(zhì)的變化（如從動(dòng)物血清到人血清）等。應(yīng)報(bào)告所有的改變，并對(duì)重新驗(yàn)證或部分驗(yàn)證的范圍說明理由。

       除以上基于方法改變進(jìn)行的部分驗(yàn)證外，為減少方法的系統(tǒng)“漂移”，尤其對(duì)于不經(jīng)常運(yùn)行的方法，建議根據(jù)需要定期開展再驗(yàn)證工作。再驗(yàn)證時(shí)通常可考慮靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度等部分指標(biāo)。

       3.交叉驗(yàn)證

       交叉驗(yàn)證是指應(yīng)用不同方法從一項(xiàng)或多項(xiàng)試驗(yàn)獲得數(shù)據(jù)，或者應(yīng)用同一方法從不同試驗(yàn)地點(diǎn)獲得數(shù)據(jù)，在對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行互相比較時(shí)，需要選擇必需的參數(shù)進(jìn)行分析方法的交叉驗(yàn)證。如果可能，應(yīng)在試驗(yàn)樣品被分析之前進(jìn)行交叉驗(yàn)證，將同一系列質(zhì)控品或試驗(yàn)樣品采用不同方法或者在不同試驗(yàn)地點(diǎn)分別進(jìn)行測(cè)定，不同方法和不同實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)的交叉驗(yàn)證應(yīng)在方法變異的許可范圍內(nèi)。

       （二）對(duì)驗(yàn)證指標(biāo)的一般要求及建議

       用于**臨床試驗(yàn)的血清樣品（尤其是來自關(guān)鍵研究的樣品）抗體檢測(cè)的方法，應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)建議考慮的相關(guān)指標(biāo)包檢出限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、線性范圍、耐用性等。其中，準(zhǔn)確度、精密度、線性及線性范圍等指標(biāo)的驗(yàn)證通常可進(jìn)行合并設(shè)計(jì)。

       相關(guān)驗(yàn)證指標(biāo)的評(píng)估，應(yīng)始于方法開發(fā)階段，且貫穿于該方法使用的整個(gè)期間。針對(duì)每個(gè)驗(yàn)證指標(biāo)的評(píng)估，均應(yīng)提前制定完善可行的方案，包括合理的判斷標(biāo)準(zhǔn)等，并做好驗(yàn)證記錄。

       1.方法的檢出限（靈敏度）

       最低檢出限是待檢樣品中能夠被檢測(cè)到目標(biāo)抗體的最低量，有時(shí)也稱靈敏度。**臨床試驗(yàn)中抗體分析方法應(yīng)有足夠的檢測(cè)限度，以便準(zhǔn)確篩選出部分基線陽性人群。在有標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，可用連續(xù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品來確定檢出限。在方法研究早期，也可通過測(cè)試連續(xù)稀釋的陽性對(duì)照血清來評(píng)估方法的靈敏度。但如果早期選擇的陽性對(duì)照血清與實(shí)際檢測(cè)的臨床試驗(yàn)血清樣品存在一定差異，早期確定的檢出限度可能不夠準(zhǔn)確，需要在檢測(cè)注冊(cè)臨床試驗(yàn)樣品前再次驗(yàn)證。

       方法檢測(cè)限的評(píng)估可以單獨(dú)進(jìn)行，也可以作為精確度和準(zhǔn)確度評(píng)估的一部分。方法的檢出限度應(yīng)能夠滿足臨床血清檢測(cè)的特定要求。

       2.專屬性

       方法的專屬性是指能夠檢出目標(biāo)抗體的能力。專屬性較好的方法應(yīng)能從復(fù)雜的血清成分中準(zhǔn)確檢測(cè)出目標(biāo)抗體。驗(yàn)證專屬性時(shí)可通過對(duì)不同稀釋度的其它特定非特異性抗體的檢出情況，來評(píng)估方法的專屬性；必要時(shí)還需要將陽性質(zhì)控血清和陰性質(zhì)控血清樣品分別與相應(yīng)的抗原成分一起孵育，通過分析對(duì)信號(hào)的抑制情況來評(píng)估其專屬性是否可以滿足檢測(cè)的需要。

       3線性及線性范圍

       線性一般是指在分析方法的范圍內(nèi)響應(yīng)信號(hào)與待測(cè)物濃度（含量）之間直接成比例關(guān)系的能力。線性范圍指測(cè)定方法能達(dá)到一定準(zhǔn)確度、精密度和線性要求時(shí)的高低限水平區(qū)間，即最低檢測(cè)量（LLOQ）和最高檢測(cè)量（ULOQ）。需要說明的是，本節(jié)中所述線性不同于具體檢測(cè)中標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性，后者一般指標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)形成的擬合曲線的線性相關(guān)系數(shù)。

       在抗體定量分析方法中，應(yīng)根據(jù)研究樣品預(yù)期的濃度范圍，確定方法的線性和線性范圍。應(yīng)盡量使用最簡單的模型描述濃度-響應(yīng)信號(hào)關(guān)系。

       驗(yàn)證時(shí)一般需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品或已知含量的陽性質(zhì)控品進(jìn)行精確的系列稀釋，在定量范圍內(nèi)至少制備5個(gè)稀釋度（LLOQ，低濃度、中濃度、高濃度、ULOQ）。以響應(yīng)信號(hào)對(duì)被分析物的濃度作圖，根據(jù)圖形是否呈線性進(jìn)行評(píng)價(jià)。如果有線性關(guān)系，可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法估算試驗(yàn)結(jié)果。在某些情況下為使分析目標(biāo)和試驗(yàn)樣品濃度呈線性關(guān)系，可在回歸分析前對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。應(yīng)提供相關(guān)系數(shù)、Y軸上的截距、回歸線的斜率等數(shù)據(jù)，還應(yīng)分析實(shí)測(cè)值與回歸線的偏差（離散性），以助于對(duì)線性作出評(píng)價(jià)。

       4.準(zhǔn)確度和精密度

       準(zhǔn)確度是指在一定范圍內(nèi)，檢測(cè)值與理論值或參考值接近的程度。一般可以用回收率、相對(duì)偏倚或其他適宜指標(biāo)表示。一般通過對(duì)已知含量的陽性質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定值和真實(shí)值之間的差異來進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證。根據(jù)方法特點(diǎn)，可采用偏倚評(píng)估、回收試驗(yàn)、與參考方法比對(duì)等方式進(jìn)行準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。

       精密度是指同一樣品多次測(cè)定結(jié)果互相接近的程度。與理化測(cè)定方法相比，各種生物學(xué)測(cè)定方法的變異一般較大?？疾炀芏鹊亩攘恳话闶侵貜?fù)性和再現(xiàn)性。前者表示的是幾乎相同的檢測(cè)條件，稱為重復(fù)性條件，如同一實(shí)驗(yàn)室、相同條件、同一操作人員等，重復(fù)性衡量的是檢測(cè)結(jié)果的最小差異；再現(xiàn)性是在完全不同的條件（再現(xiàn)性條件）下，如不同實(shí)驗(yàn)室、不同條件、不同操作人員，衡量的是檢測(cè)結(jié)果的最大差異。此外，還應(yīng)考慮介于中間狀態(tài)條件的所謂中間精密度條件，如相同實(shí)驗(yàn)室，不同操作人員等。精密度一般以測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)或相應(yīng)的置信區(qū)間來表示。

       5.方法的耐用性

       方法的耐用性是指在正常使用期間方法的可靠性，是條件發(fā)生微小變化時(shí)，檢測(cè)結(jié)果不受影響的承受程度。方法的耐用性可通過測(cè)定條件的微小而故意的變化對(duì)方法的影響來進(jìn)行評(píng)估。例如，溫度、培養(yǎng)時(shí)間或緩沖特性(如pH和鹽濃度)的變化都可能影響檢測(cè)結(jié)果。應(yīng)在方法的早期研究階段就關(guān)注方法的耐用性，以便及時(shí)采用合理的預(yù)防措施。

       分析方法應(yīng)具有良好的耐用性，驗(yàn)證時(shí)考慮的要素可包括樣品采集、處理、存儲(chǔ)及凍融的條件變化；檢測(cè)所用試劑、設(shè)備儀器等的變化；反應(yīng)的溫度、PH值等條件的變化。根據(jù)具體情況，可針對(duì)一個(gè)或幾個(gè)關(guān)鍵的條件進(jìn)行驗(yàn)證。在每種試驗(yàn)條件下，均需對(duì)準(zhǔn)確度、精密度或其他指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

       五、制定方法的SOP

       方法建立并完善后，應(yīng)有詳細(xì)、規(guī)范可操作的《標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》（SOP）。SOP中除一般檢測(cè)步驟相關(guān)內(nèi)容外，還應(yīng)包括對(duì)試驗(yàn)樣品稀釋方法及稀釋液、檢測(cè)結(jié)果的處理分析、需要重復(fù)檢測(cè)的具體情況及結(jié)果處理等內(nèi)容的明確規(guī)定。檢測(cè)過程中應(yīng)嚴(yán)格按照SOP實(shí)施，對(duì)任何違背SOP的行為應(yīng)有合理科學(xué)的解釋，并分析對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。應(yīng)根據(jù)方法再驗(yàn)證情況及時(shí)更新SOP內(nèi)容及版本。

       六、方法的實(shí)施

       一般情況下，**臨床試驗(yàn)血清樣品抗體檢測(cè)結(jié)果是支持**注冊(cè)申報(bào)的重要證據(jù)之一。因此，其檢測(cè)方法的研究以及試驗(yàn)樣品檢測(cè)過程應(yīng)符合規(guī)范，以保證檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、可靠、可溯源。

       應(yīng)首先制定該項(xiàng)目專有的文件資料。根據(jù)項(xiàng)目名稱進(jìn)行統(tǒng)一編號(hào)，并在文件資料及實(shí)驗(yàn)記錄中使用該項(xiàng)目名稱和編號(hào)。檢測(cè)工作開始之前，應(yīng)根據(jù)臨床試驗(yàn)方案制訂一份詳細(xì)、清晰的分析工作實(shí)施方案，內(nèi)容一般包括：項(xiàng)目信息、實(shí)驗(yàn)室的信息、人員信息、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募坝?jì)劃、樣品信息、設(shè)備、試劑和材料等信息；分析方法及方法學(xué)驗(yàn)證；實(shí)驗(yàn)過程中重復(fù)檢測(cè)的相關(guān)規(guī)定；實(shí)驗(yàn)資料的清單及保存地點(diǎn)；處理、報(bào)告實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果的方法。實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、申辦者簽字同意，并注明日期后生效；不應(yīng)與委托合同或臨床試驗(yàn)方案相沖突；對(duì)已有實(shí)驗(yàn)方案的修改，應(yīng)書面說明原因，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、申辦者簽字同意后生效；針對(duì)實(shí)驗(yàn)方案或修改后的實(shí)驗(yàn)方案，應(yīng)對(duì)參加相關(guān)工作的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行培訓(xùn)并記錄存檔。試驗(yàn)過程中，應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)記錄，包括樣品取出情況（樣品量及取出時(shí)的溫度）、檢測(cè)過程、復(fù)測(cè)情況，剩余樣品處理情況以及對(duì)檢測(cè)結(jié)果的初步分析等，以確保整個(gè)檢測(cè)過程規(guī)范、檢測(cè)數(shù)據(jù)可追溯。

       附錄1.名詞解釋

       標(biāo)準(zhǔn)品：國家生物標(biāo)準(zhǔn)品系指用國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的，或我國自行研制的用于定量某一制品的效價(jià)或**的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（其生物活性效價(jià)以IU或U表示）。

       參考品：國家生物參考品系指用國際參考品標(biāo)定的，或我國自行研制的用于微生物定性鑒定或疾病診斷，或用于定量檢測(cè)制品的生物效價(jià)的參考物質(zhì)（其生物效價(jià)不以IU或U表示，而以活性單位表示）。

       創(chuàng)新型**：是指境內(nèi)外均未上市的**，包括無有效預(yù)防手段疾病的**；在已上市**基礎(chǔ)上開發(fā)的新抗原形式，如新基因重組**、新核酸**、已上市多糖**基礎(chǔ)上制備的新的結(jié)合**等；含新佐劑或新佐劑系統(tǒng)的**；含新抗原或新抗原形式的多聯(lián)/多價(jià)**。